骨骼肌受體酪氨酸激酶自身抗體檢測試劑盒 科潤達生物提供的德國IBL品牌的骨骼肌受體酪氨酸激酶自身抗體檢測試劑盒，簡寫為musk試劑盒。本次介紹的musk試劑盒是采用酶聯免疫法，該方法操作簡單方便，有較高的靈敏度和特異性強的特征，能準確的檢測出陰性陽性結果，并且帶有96孔的可拆卸包被板，能夠節省很多時間成本。ELISA方法也普遍應用于科研當中。 此外科潤達生物還提供部分試劑盒的代測服務，歡迎咨詢了解。 通用名稱：骨骼肌受體酪氨酸激酶自身抗體檢測試劑盒（酶聯免疫法） 英文名稱：MuSK-Ab ELISA 產品規格：96T 產品貨號：RE51021 產品品牌：德國IBL musk試劑盒預期用途 musk試劑盒可定性和定量檢測人血清中抗骨骼肌受體酪氨酸激酶自身抗體。僅用于科研使用。 前言簡介 重癥肌無力（MG）是由于自身抗體作用使神經肌肉傳遞失敗而導致的。大約80—90%的廣義MG病人均有肌肉煙堿型乙酰膽堿受體的自身抗體。這些抗體會導致乙酰膽堿受體數量減少和功能的喪失，并導致神經肌肉傳遞失敗—肌無力。10—20%的廣義重癥肌無力病人和多達50%的眼肌型重癥肌無力患者無法檢測到乙酰膽堿受體抗體。這種情況通常被稱為血清反應陰性的重癥肌無力。血清反應陰性的重癥肌無力已被認為是一種抗體介導的疾病。 骨骼肌特異性受體酪氨酸激酶抗體（MuSK-Ab）已證實存在于廣義的血清反應陰性的重癥肌無力病人的血清中（大約40%血清反應陰性的MG病人）。MuSK是一種集聚蛋白受體復合物的一部分并且在突觸形成過程中誘導乙酸膽堿受體的聚集，而且Musk也在成熟神經肌肉接點（NMJ）表達。Musk MG病人大多數為女性，有顯著的頭顱和累及延髓與其他形式的MG相比會有更高的風險。疾病的發作往往在早期，大多數病人在30-40歲出現癥狀。檢測MuSK抗體非常有助于診斷和臨床管理MG病人。 musk試劑盒檢測原理 musk試劑盒是利用固相酶聯免疫吸附檢測試驗（ELISA）。包被孔中包被了抗原。病人樣本中的抗體連結到包被孔中的抗原，并通過信號放大系統檢測出來。顯色反應是通過結合到抗體的堿性磷酸酶催化的。生成的顏色強度與樣本中相應抗體濃度成正比關系。定性或者定量結果分別通過臨界質控或者標準曲線得到。 musk試劑盒組成成分 名稱 | 數量 | 成分 | | 微孔板 | 12×8 | 包被有高度純化的重組MuSK蛋白 | | 酶聯物 | 1×0.25ml | 含堿性磷酸酶標記的特異性抗體 | | 抗血清 | 1×13ml | 含抗人免疫球蛋白、穩定劑 | | 標準品A~E | 5×12ml | 即用型 濃度0、0.4、2.5、5、12U/ml | | 陽性質控 | 1×1.2ml | 紅色 即用型 | | 陰性質控 | 1×1.2ml | 綠色 即用型 | | 分析緩沖液 | 1×120ml | 紅色 即用型 | | 洗滌液 | 1×100ml | 10倍濃縮 | | 底物液 | 1×13ml | 即用型 | | 終止液 | 1×15ml | 含1M NaOH、0.25M EDTA |
需要的材料（未提供） 1) 移液器，體積5、10、20、50、100、1000μL 2) 一次性的玻璃管(12×75 mm) 3) 聚丙烯（PP）管（例如Sarstedt） 4) 旋渦混合器 5) 溫育箱，37℃ 6) 8通道的移液器，帶加樣槽 7) 洗瓶、自動或者半自動洗板機 8) 酶標儀 9) 雙蒸水或去離子水 10) 吸水紙、吸嘴和秒表 儲存條件 musk試劑盒和運輸環境和儲存環境溫度為2-8℃，避免熱源或太陽直射。樣品的儲存與穩定性及試劑的準備將在相關章節中闡述。開封的試劑盒在有效期內穩定，前提是要將試劑盒用袋子密封并儲存于2-8℃的環境下。 樣本要求 血清 遵從靜脈穿刺采集全血的常規注意事項。從采集血液樣品的那一刻起到檢測時都應保持血液樣品的化學整體性。不要使用明顯溶血、黃疸血和脂血樣品。如果樣品出現混濁，則在實驗前應當離心以除去所有的微粒物質。 保存 | 2-8℃ | ≤ -20℃（分裝） | 避免熱源或太陽直射，避免反復凍融 | 穩定性 | 7天 | 6個月 |
檢測方法 凍干或者濃縮成分的制備 體積 | 成分 | | 稀釋液 | 比例 | 備注 | 保存 | 穩定性 | 20ml | 濃縮洗滌液 | 180 mL | 雙蒸水 | 1:10 | 充分混勻 | 2-8℃ | 4周 | 40 μL | 酶聯物 | 4 mL | 分析緩沖液 | 1:101 | 混勻，避免氣泡 | 2-8℃ | 48小時 |
樣本的稀釋 病人樣本 | 稀釋 | 稀釋液 | 比例 | 備注 | 血清 | 常規 | 分析緩沖液 | 1:101 | 例如：10μL血清樣本+1000μL分析緩沖液 |
musk試劑盒檢測步驟 1、移取100μL的標準品、質控品和稀釋的病人樣本至相應的微孔中，蓋板 2、在定軌搖床上（500rpm）室溫（18-25℃）溫育60分鐘 3、棄去孔中溶液。使用稀釋的洗滌液每次250μL洗板3次，在吸水紙上拍干 4、每孔加入100μL抗血清，蓋板 5、在定軌搖床上（500rpm）室溫（18-25℃）溫育60分鐘 6、棄去孔中溶液。使用稀釋的洗滌液每次250μL洗板3次，在吸水紙上拍干 7、每孔加入100μL已稀釋的酶聯物，蓋板 8、在定軌搖床上（500rpm）室溫（18-25℃）溫育60分鐘 9、棄去孔中溶液。使用稀釋的洗滌液每次250μL洗板3次。在吸水紙上拍干 10、加底物液和終止液建議使用8通道移液器。移取底物液和終止液應該為相同的時間間隔。避免氣泡的生成 11、每孔加入100μLPNPP底物液。輕輕搖動酶標板混勻溶液 12、在室溫（18-25℃）溫育30分鐘 13、每孔加入100μL PNPP終止液終止顯色反應。輕輕搖動酶標板混勻溶液 14、在405nm處檢測吸光度（參考波長為600—650nm），應在加入終止液后60分鐘內讀數 結果計算 質量控制 該實驗結果只有在按照說明書操作才有效。此外，使用者必須嚴格按照GLP規范或者其他適合的準則/法律。所有的試劑盒質控品必須在標簽和QC證書的可接受范圍內。如果不符合該條件，則實驗無效并需要重做。每個實驗室應使用已知的樣本作為進一步的質控。建議進行適當的質量評價試驗。 如果有任何的偏差，以下的技術問題應給予證實：試劑的有效期、保存條件、移液器、設備、溫育條件和洗滌方法。 定性評價 標準品B（臨界標準品）的吸光度為臨界值（CO）。通過樣本的平均吸光度比臨界值可以計算臨界指數（COI），樣本的吸光度更高的為陽性，樣本吸光度低的為陰性。 例如： 臨界值（標準品B吸光度）=0.23 樣本OD值=0.7 臨界指數（COI）：0.70/0.23=3.04。樣本應被認為是陽性。 定量評價 以標準品的OD值為Y軸（線性），相應的濃度為X軸（對數）在半對數坐標紙或者自動分析軟件上作出標準曲線，使用三次樣條函數、4參數或者Logit-Log可以得到良好的擬合度。 計算標準曲線應該使用每個標準品的OD值（在重復檢測中一個明顯的異常值應忽略而采用一個更可靠的單值）。 科潤達生物還提供更多其他自身免疫類的試劑盒，歡迎咨詢了解。 想了解更多產品信息，歡迎咨詢我們獲取資料。 |
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