EPO紅細(xì)胞生成素檢測試劑盒 【產(chǎn)品規(guī)格】 96T
【預(yù)期用途】 該試劑盒可用于人血清中紅細(xì)胞生成素的體外定量檢測。可輔助診斷貧血和紅細(xì)胞增多癥。隨著重組EPO的出現(xiàn)，它可作為生物治療增加紅細(xì)胞數(shù)量，那么EPO試驗就可用于輔助貧血癥病人的預(yù)測和用藥過程的觀察
【前言簡介】 EPO是分子量為30000-340000道爾頓的糖蛋白，人EPO是由165個氨基酸組成的多肽，包含有一個O-連接和3個N-連接的糖鏈。重組EPO在免疫試驗中是天然蛋白的良好替代品。血清中的EPO水平由蛋白的生成率和清除率決定，90%的EPO由成人腎臟的腎小管細(xì)胞產(chǎn)生，組織氧化中會降低?，F(xiàn)象表明，這些細(xì)胞中用于檢測血氧飽和度的蛋白是一種血紅素基團，隨著血漿中的氧分壓的降低，EPO濃度會增加，這也提示我們在正常的細(xì)胞內(nèi)，血清中EPO濃度與紅細(xì)胞量呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。 血清中EPO濃度的定量檢測可輔助貧血或紅細(xì)胞增多癥的診斷。再生障礙性貧血，溶血性貧血和貧血都是由于缺鐵導(dǎo)致海拔血清EPO。而繼發(fā)性貧血患者體內(nèi)的EPO水平是由于腎功能衰竭和其他疾病如獲得性免疫缺陷綜合征（AIDS）引起，這就是zui有可能由于腎臟受損而引起的EPO大量產(chǎn)生的原因。低濃度的EPO可對腎移植排斥反應(yīng)做出早期預(yù)警，還可以用于監(jiān)測艾滋病人使用AZT的治療過程，EPO濃度的增加表明貧血與AZT治療相關(guān)聯(lián)是由于紅細(xì)胞發(fā)育不全或apliasia 紅血球增多癥，或原發(fā)性紅細(xì)胞增多癥（紅細(xì)胞量增加）起因于紅細(xì)胞未受到刺激，因此，血紅蛋白的增加引起EPO的減少，導(dǎo)致血清中EPO水平降低。繼發(fā)性紅血球增多癥，也是總紅細(xì)胞數(shù)增加，循環(huán)EPO水平提高的生理反應(yīng)，引起了組織缺氧，缺氧因素可能有肺纖維化，心血管疾病，長期暴露在高海拔地區(qū)，異常形式的血紅蛋白和藥物治療。一些腫瘤也會產(chǎn)生EPO，這種情況下，EPO可作為監(jiān)測有效治療的腫瘤標(biāo)記物。
【檢測原理】 此試劑盒采用的是雙位點酶聯(lián)法，檢測具有生物活性的EPO氨基酸鏈，采用兩種不同的鼠單抗與人EPO特異性結(jié)合。一個是生物素標(biāo)記的鼠單抗，另外一個是HRP標(biāo)記鼠單抗。 試驗中，標(biāo)準(zhǔn)品，質(zhì)控品或是樣品與酶標(biāo)抗體和生物素標(biāo)記抗體一起在鏈霉親和素包被的微孔板內(nèi)孵育，孵育結(jié)束后，洗去未結(jié)合的成分，再加入TMB底物液孵育，終止液加入終止反應(yīng)，顏色變?yōu)辄S色。黃色強度與樣品中的EPO成正比，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度和OD值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，質(zhì)控和樣本中的EPO濃度可直接從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取。標(biāo)準(zhǔn)品已經(jīng)WHO EPO標(biāo)準(zhǔn)認(rèn)證，WHO參考標(biāo)準(zhǔn)品是EPO*標(biāo)準(zhǔn)（87/684）
【試劑盒成分】 試劑1（RTG1），生物素標(biāo)記的EPO抗體（抗人EPO鼠單抗），1x3.5ml,Proclin 300作為防腐劑 試劑2（RTG2）,1x3.5ml，HRP標(biāo)記抗體(抗人EPO鼠單抗) 試劑A（RTG A），1x30ml，洗滌濃縮液 試劑B（RTG B）, 1x20ml，TMB底物液 終止液（SOLN），1x20ml，1N硫酸 微孔板（PLA），12x8孔 標(biāo)準(zhǔn)品（CAL），標(biāo)準(zhǔn)品A：0mIU/ml，1x4ml；標(biāo)準(zhǔn)品B-F，1x2ml，具體濃度見標(biāo)簽。凍干，合成h-EPO，零標(biāo)準(zhǔn)品是蛋白緩沖液，其他的標(biāo)準(zhǔn)品則是含有合成物h-EPO（1-165）的蛋白緩沖液 質(zhì)控品（CTRL），質(zhì)控1&2，凍干，2ml/支，含含有合成物h-EPO（1-165）的蛋白緩沖液，含有環(huán)丙沙星防腐劑
實驗所需材料但試劑盒未提供 450nm和405nm的酶標(biāo)儀 洗板機 移液器，25；200；100；150ul 多通道移液器，25；100；150ul 計時器 去離子水或蒸餾水 振蕩器
【注意事項】 實驗前認(rèn)真閱讀實驗說明書，嚴(yán)格按照要求操作才能得到好的實驗結(jié)果 高低質(zhì)控在每次實驗都應(yīng)檢測，可便于評估實驗結(jié)果的可靠性 試劑的配制或稀釋應(yīng)用去離子水或雙蒸水 處理試劑盒樣本時應(yīng)戴手套，減少傷害 實驗前將所有試劑和樣本平衡至室溫，混勻，避免反復(fù)凍融 每次試驗都應(yīng)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線 每次試驗都應(yīng)做質(zhì)控，并確保結(jié)果在質(zhì)控范圍內(nèi) 操作不當(dāng)，加樣量不準(zhǔn)，洗板不*，試劑貯存不當(dāng)都會影響到質(zhì)控結(jié)果不在可接受范圍 酶標(biāo)儀讀數(shù)時，若存在有氣泡則會影響OD值，讀數(shù)前小心移除所有氣泡 底物液光敏感物質(zhì)，應(yīng)避光保存，穩(wěn)定性降低或污染會導(dǎo)致試劑顏色變藍，而不能再用 加底物液和終止液時，避免接觸到金屬材料 避免試劑交叉污染，每次加樣時都采用新的槍頭 不要將不同批次的試劑混合，不要使用過期的試劑 所有試劑廢物的處理應(yīng)嚴(yán)格按照國家規(guī)定實施
【參考文獻】 1. Sawyer, S.T., Krantz, S.B., Sawada, K. Receptors for Erythropoietin in Mouse and Human Erythroid Cells and Placenta. Blood 1989; 74: 103-109. 2. Imai, N., Kawamura, A., Higuchi, M., et al. Physicochemical and Biological Comparison of Recombinant Human Erythropoietin with Human Urinary Erythropoietin. J Biochem 1990; 107: 352-359. 3. Jacobson, L.O., Goldwasser, E., Fried, W., Pizak, L.F. The Role of the Kidney in Erythropoiesis.Nature 1957; 179: 633-634. 4. Koury, S.T., Bondurant, M.C., Koury, M.J. Localization of Erythropoietin Synthesizing Cells in Murine Kidney by in-situ Hybridization. Blood 1988; 71: 524-527. 5. Goldberg, M.A., Dunning, S.P., Bunn, H.F. Regulation of the Erythropoietin Gene: Evidence that the Oxygen Sensor is a Heme Protein. Science 1988; 242: 1412-1415. 6. Erslev, A.J., Caro, J., Birgegard, G., Silver, R., Miller, O. The Biogenesis of Erythropoietin.Experimental Hematology 1980; Suppl 8: 1-13. 7. Spivak, J.L. The Mechanism of Action of Erythropoietin. Int J Cell Cloning 1986; 4: 139-166. 8. Erslev, A.J. Erythropoietin. New Eng J Med 1991; 324:1339-1344.
|
點擊放大
